黄芪是一种常用中药，始载于《神农本草经》，为中医传统的重要益气药。现代药理研究报道，黄芪有抗衰老、免疫调节、促进造血、加强心肌收缩力、保护肾功能等多方面的药理作用[1,2]，在清除自由基作用方面亦有报道[3]。黄芪总提取物（TEA）是从膜荚黄芪根中提取的有效成份，其中黄芪总甙(totalsaponinsofastragalus,TSA)含量占50％以上，已有报道TSA有良好的清除氧自由基作用[4]，我们研究亦表明，TEA具有抗氧化、免疫调节与抗炎等作用(待发表)。已知氧自由基和免疫功能减退可能参与衰老进程[5]，本文观察TEA在延缓小鼠自然或人工衰老进程中的抗氧化作用。

　　1　材料与方法

　　1.1动物昆明种小白鼠，3～4mon龄，100只，体重(30±3)g；14mon龄，40只，体重(55±4)g，均购于安徽医科大学实验动物中心,合格证号为:皖医实动准第01号。

　　1.2药品TEA由江苏药物研究所植化室提供，黄芪总甙含量占50％以上。用1％羧甲基纤维素钠（CMC_Na）制成混悬液,供ig给药；维生素E（VE）,Merck公司产品，用少量无水乙醇溶解后，再用1％CMC_Na制成混悬液,供ig给药（乙醇终浓度<0.2％)；D_半乳糖(D_gal)，Sigma公司产品，用生理盐水配成浓度为0.5％溶液，高压灭菌，置4℃冰箱贮存备用。

　　1.3试剂硫代巴比妥酸（TBA），上海试剂二厂产品;三氯乙酸（TCA），如皋市化学试剂厂；1，1，3，3_四乙氧基丙烷（TEP），5,5′_二硫代对二硝基苯甲酸（DTNB）,均为Fluka产品；还原型谷胱甘肽（GSH，AR级），上海试剂三厂产品；氧化型谷胱甘肽（GSSG），上海丽珠东风生物技术有限公司；邻苯二甲醛（OPT），上海试剂一厂产品；牛血清白蛋白，N_乙基马来酰亚胺（NEM）均为Sigma公司产品；酚试剂，上海市医学化验所产品；SOD测定试剂盒，南京建成生物工程研究所产品。

　　1.4仪器GL20A型全自动高速冷冻离心机，湖南仪器总厂离心机厂生产；Hitach_650型荧光分光光度计，日本日立公司产品；721分光光度计，上海第三分析仪器厂产品；7530_G紫外分光光度计，上海雷磁仪器厂；CPS_1A超声波粉碎机，上海超声波仪器厂；内切式组织匀浆机，浙西机械厂。

　　1.5方法

　　1.5.1D_gal衰老小鼠模型的制备[6]小鼠scD_gal40mg.kg-1,隔日1次，共10wk。每周称体重1次，并按此调整D_gal剂量。

　　1.5.2肝、脑细胞中线粒体的制备[7]眼球放血处死小鼠，立即取出肝脏和脑组织，分别用冰冷的生理盐水制成10％匀浆（W/V），4℃离心，（3500r.min-1，10min）,取上清液，再4℃离心（11812r.min-1，15min）,沉淀为线粒体。将线粒体悬于生理盐水中，-20℃贮存待测。一部分线粒体悬液经CPS_1A超声波粉碎机粉碎，60μA，5s/次，间隙10s，反复4次使线粒体微粒破碎，4℃离心（2000r.min-1，10min）,取上清液供酶活力测定。以上操作皆在4℃以下进行。另一部分线粒体悬液直接供丙二醛（MDA）与蛋白质的测定。

　　1.5.3线粒体MDA含量的测定采用硫代巴比妥酸比色法[8]，根据TEP标准曲线计算MDA含量，结果以nmol.mg-1Pr表示。蛋白质含量测定采用改良Lowry氏法[9]。

　　1.5.4线粒体中谷胱甘肽过氧化物酶(GSHpx)活性测定取线粒体裂解液上清0.4ml，用DTNB法检测[10]，GSHpx活力单位以μmol.min-1.mg-1Pr表示。

　　1.5.5线粒体锰超氧化物歧化酶（Mn_SOD）活性测定按SOD测定试剂盒说明书进行，采用黄嘌呤氧化酶法测Mn_SOD活性。其活力单位以NU(国际单位).mg-1Pr表示。

　　1.5.6线粒体GSH含量测定采用DTNB比色法[11]，在412nm处测吸光度值。根据标准曲线计算GSH含量，结果以nmol.mg-1Pr表示。

　　1.5.7线粒体GSSG含量测定[12]取线粒体裂解液上清1.0ml，加入0.04mol.L-1NEM水溶液0.4ml，室温放置30min后，加0.187mol.L-1NaOH溶液1.5ml，OPT溶液（1mg.ml-1）0.1ml充分混合，室温放置30min。在激发波长350nm,发射波长430nm处测荧光强度（F）值，并在标准曲线上查出相应的GSSG含量，以nmol.mg-1Pr表示。

　　1.6数据处理实验数据以±s表示，采用t检验判定。