黄芪(Radix Astragali)是临床常用的中药之一,具有补气升阳、利水消肿等功效。近年来的研究表明,黄芪具有抗氧化的作用 [1] 。近年来,随着老年疾病与动脉粥样硬化(AS)相关研究的深入,抗氧化作用被认为是防
治AS [2] 与抗衰老的有效途径。本文对黄芪的重要成分黄芪多糖的抗氧化作用进行研究。
1 实验材料
1.1 药品 70%黄芪多糖溶液及冻干粉(70%黄芪多糖溶液购自广东省中医院,自行冻干);香菇多糖片(江苏省江阴制药厂);D-半乳糖(上海试剂二厂);胆固醇粉(化学纯,荷兰进口由上海试剂站分装);猪油(自制);油红O染料(sigma公司),血脂检测试剂盒(北京科华公司),高密度脂蛋白检测试剂盒(北京中生生物高技术公司),载脂蛋白检测试剂盒(北京九强生物公司);MDA及SOD检测试剂盒(南京建成生物工程研究所);过氧铬酸钾(自行合成);可见光分光光度仪(HP公司)。HPIAS—1000彩色病理图像分析系统(日本日立公司)
1.2 实验动物 小鼠,昆明种(广州省医学实验动物中心提供);雄性健康新西兰大白兔(广州省医学实验动物中心提供)。
2 实验方法与结果
2.1 抗衰老实验 取小鼠50只,体重18~20g,雌雄各半,随机均匀分为5组。其中4组每鼠颈背部皮下注射D-半乳糖(1.25g/kg)造衰老模型,每日注射1次,连续40天;另一组颈背部皮下注射生理盐水作为空白对照组。每3天称重1次,根据体重调整用药量。从第11天开始,造模4组分别灌服大、小剂量的黄芪多糖水溶液、香菇多糖片混悬液和同体积生理盐水,连续灌药30天,于最后1次给D-半乳糖。灌药后lh,小鼠眼眶取血,血液肝素抗凝备用,再取小鼠肝、脑,制各肝匀浆和脑匀浆备用。
2.1.1 对衰老模型小鼠血超氧化物歧化酶(SOD)活力的影响 取小鼠血50μl,加入盛有5ml生理盐水刻度离心管中离心,弃去上清液。加预冷双蒸馏水0.2m1,溶血后加预冷95%乙醇0.1ml,振摇,再加预冷氯仿0.1ml,混合器上抽提2ml离心得抽提液,按试剂盒说明书测血SOD活力。结果见表l。
2.1.2 对衰老模型小鼠血过氧化氦酶(CAT)活力的影响 取30%过氧化氢0.52ml,加水至50ml,取出4ml,加入pH7.0的0.05mol/L磷酸缓冲液26ml,在230nm处测lcm光路的OD值为0.53。可作为过氧化氢酶的底物溶液,按文献 [3,4] 法测定和计算血CAT活力,结果见表l。
2.1.3 对衰老模型小鼠血谷光甘肽(GSH—PX)活力的影响 按献 [3,4] 法测定血中GSH-PX活力,结果见表1。
2.1.4 对衰老模型小鼠血浆过氧化脂质(LPO)含量的影响 按文献 [3,4] 法测血浆过氧化脂质水平,结果见表2。
2.1.5 对衰老模型小鼠肝匀浆和脑匀浆中过氧化脂质(LPO)含量的影响 取少许肝脏,清洗后滤纸吸干水分。用匀浆器制5%的肝匀浆。精取肝匀浆1.5m1,按文献 [3,4] 方法测肝匀浆LPO水平,脑匀浆中LPO的测定同肝匀浆。结果见表2。
表1 黄芪多糖对衰老模型小鼠血SOD、CAT、GSH—PX活力的影响 (略
注:与模型组相比, ˇ P<0.05, ˇˇ P<0.01
表2 黄芪多糖对衰老模型小鼠血浆、脑匀浆、肝匀浆中LPO的影响 (略)
注:与模型组相比, ˇˇ P<0.01