3 方法学考察
3. 1 线性关系 分别精密吸取贮备液100, 200, 400, 600,1100, 2000μL,置1mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,取以上溶液各20μL, 注入液相色谱仪,按
上述条件进行测定,各浓度分别测定2次,以进样量(μg)的常用对数值为横坐标,以对照品峰面积的常用对数值为纵坐标,绘制标准曲线。求得回归方程为: Y=1.0623X + 1.633, r=0.9994,进样量在2.061～41.663μg内呈良好的线性关系。
3. 2 黄芪甲苷含量的测定 分别精密量取各样品溶液20μL,注入液相色谱仪,按上述方法进行测定,将测出的各样品溶液峰面积的常用对数值代入回归方程,计算出各样品溶液的黄芪甲苷含量。
3. 3 精密度试验 取对照品溶液,连续重复进样5次,每次进样20μL,按上述条件进行测定,黄芪甲苷峰面积的RSD为2.44。
3. 4 稳定性试验 以内蒙古呼和浩特产黄芪药材为供试品,分别在0,2,8,12,24h进样,按上述条件进行测定,结果表明,各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值无明显变化。说明本方法稳定。
3. 5 重现性试验 取内蒙古呼和浩特产黄芪药材5份为供试品,按样品溶液制备方法处理,按上述条件进行测定,结果表明,各色谱峰的相对保留时间和单峰面积大于或等于10的峰(1,5,6,s号峰)面积比基本一致。
3. 6 样品测定 按样品溶液的制备方法操作,分别取各批药材制成样品溶液,取20μL进样。同前条件测定图谱,结果表明:5个不同产地的黄芪药材有13个共有峰,其HPLC指纹图谱基本一致,共有峰面积之和均大于各总峰面积的90,但其共有峰面积的比值有一定差异。
4 讨论
本试验曾用10.0g药材, 50mL甲醇浸泡1h,索氏提取器回流提取,但由于样品量少,提取时间长,测出结果不理想;后改用30.0g药材, 140mL甲醇浸泡过夜,超声提取法提取,大大提高了样品的浓度,使各峰分离效果好。
本试验曾试图采用高效液相色谱仪2蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法测定不同产地黄芪的指纹图谱,但测出黄芪各峰的分离度不好,干扰成分多;后改用紫外检测器(HPLC)进行测定,才达到较理想效果。
试验结果表明,5个不同产地黄芪药材指纹图谱中主要峰群的整体图貌基本一致。但各成分峰面积的相对比值有所不同,为快速鉴别区分不同来源的药材提供了科学的依据。
本文采用HPLC色谱法,建立了黄芪药材的指纹图谱分析方法。结果表明:方法稳定、可靠、重现性好。
文章内容
相关主题