1 原文研究要点
作者为了研究中药黄芪(AMB)提取物对体外培养的肝癌细胞的抑制活性，将AMB经粉碎、浸提、超速离心、减压浓缩、冷冻干
燥得到AMB提取物. 然后，以AMB提取物按不同时间处理人肝癌SMMC-7721细胞，再以MTT法检测其对人肝癌SMMC-7721细胞线粒体代谢活性的影响，以细胞记数法观察了其对细胞增殖的影响. 结果显示，①AMB提取物可明显抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长，降低线粒体代谢活性；②经AMB提取物处理24h后的人肝癌细胞，即使更换为正常培养基，其线粒体代谢活性及细胞与对照相比仍差异显著. 从而认为中药AMB提取物含抑癌活性物质，能抑制体外培养的肝癌细胞增殖和降低线粒体代谢活性.
2 评论
2.1 黄芪的主要作用 黄芪是一味健脾益气、固表利尿、托毒排脓、敛疮生肌的要药，始载于神农本草，受到历代著名医家的重视，临床应用极为广泛［1，2］. 建国以来，对黄芪的临床疗效观察和药理研究日益深入，取得了十分显著的进展，也积累了极其丰富的资料，有关药理作用的研究文献也屡见不鲜. 可主要归纳如下.
2.1.1 对免疫系统的作用 包括①对非特异性免疫功能的影响：用黄芪水煎剂(320g/L)口服能增加网状内皮系统的吞噬功能，吞噬指数明显提高，血液中的白细胞数及多核白细胞数增加. 黄芪注射液腹腔给药，对正常小鼠和氢化泼尼松小鼠胸腺有增重作用，并增加氢化泼尼松小鼠网状内皮系统吞噬功能：增加环磷酰胺小鼠血清溶血素抗体生成能力；增强正常及荷瘤小鼠淋巴细胞转化能力［3］. 浓度25mg/L的黄芪多糖在体外能刺激小鼠CFU-MK的生成；20mg/kg和100mg/kg的黄芪多糖连续注射3d，小鼠CFU-MK的生成量均明显高于对照组；对环磷酰胺(CTX)引起的小鼠CFU-MK生成下降，黄芪多糖无保护作用. 提示黄芪多糖对小鼠CFU-MK的生成有促进作用，但无法缓解CTX对小鼠CFU-MK生成的抑制作用［4］. 黄芪能使巨噬细胞吞噬功能增强，指数增高，能提高巨噬细胞内醋酸α-萘酚酯酶(ANAE)、酸性磷酸酶(Acpase)、三磷酸腺苷酶(ATPase)糖原及粘多糖(PAS)4种物质含量，说明黄芪能增加整体细胞活力和膜功能，加强细胞内细胞器的糖代谢，加快糖原贮存与合成，加强巨噬细胞对抗原处理和免疫调节作用［5］. ②对体液免疫功能的影响：黄芪对正常机体的抗体生成的功能有明显的促进作用，黄芪1kg/L水煎剂可提高溶血空斑数及抗原结合细胞(RFC)数，包括抗体分泌细胞及T、B淋巴细胞与NK细胞. 可提高血清IgG, IgM, IgA含量. ③对细胞免疫功能的影响：黄芪水煎剂口服可促进正常人和肿瘤患者淋巴细胞转化率E-花环形成率和增强NK细胞的细胞毒作用等. ④对诱生干扰素的影响：黄芪对干扰素系统有明显的刺激作用，包括自身诱生、促进诱生和活性发挥等方面，从而在一定程度上抑制病毒繁殖，尤以抗流感病毒的作用明显.
2.1.2 对机体代谢的作用 包括①对细胞代谢的影响：黄芪能明显延缓人胚肺二倍体细胞自然衰老过程，延长细胞寿命1/3左右. 在营养液中加入5g/L黄芪，可使活细胞数明显增多，细胞生成旺盛. 说明黄芪可促使细胞代谢作用增强. ②对核酸代谢的影响：黄芪对体外培养的肝细胞RNA合成有促进作用，黄芪煎剂可显著促进骨髓造血细胞DNA的合成，加快有核细胞分裂过程. ③对内环核苷酸的影响：黄芪煎剂可以明显提高血浆和组织的内环核苷酸(cAMP和cGMP)的含量，虽然对各器官组织的影响可能不完全相同，但对cAMP升高的百分率与对照组相比有明显差异. 老年大鼠cAMP, cGMP含量显著高于青年大鼠，但cAMP/cGMP比值降低(P＜0.05)，人参，黄芪均可以纠正这三项指标的改变，使之与青年大鼠接近. 结论：对血浆环核苷酸的调节是人参和黄芪抗衰老作用的一个方面［6］.
2.1.3 其他 黄芪对中枢神经系统、心血管系统、泌尿系统、血液系统、应激反应、保肝作用、抗菌和抗病毒等各方面均有一定的治疗效应. 黄芪可以降低大鼠心梗6wk后血浆和心脏血管紧张素Ⅱ及血浆醛固酮的浓度，可见黄芪可降低左室非梗死区胶原含量，降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白比值［7］. 黄芪可抑制糖尿病大鼠肾皮质TGF-β的过度表达，其防治糖尿病肾病(DN)发生、发展的作用机制可能部分是通过抑制TGF-β的过度表达［8］. 黄芪注射液(终浓度5μg/L～20μg/L)使豚鼠冠状动脉流量增加，呈量效依赖关系，并使心肌收缩力增强，对冠脉有直接扩张作用［9］. 黄芪治疗肾病综合征后，UN-AG，UGa1, Uβ 2-MG，Pβ 2-MG，Uγ-ＧＴ均较对照组为低，PALb较对照组为高，而蛋白定量无差异，说明黄芪注射液通过改善NS患者低蛋白血症状态对肾小管起保护作用［10］. 黄芪对衰老大鼠降低的脑M胆碱受体密度有上调作用［11］. 陈富春
et al研究结果显示，与相应对照组比较，不论是全脑缺血还是局灶性脑缺血1h后再灌流黄芪注射液3d，应用黄芪的各组动物脑水肿明显减轻，血脑屏障通透性改善，大脑局部血流量显著增加，提示黄芪对脑缺血后脑水肿、血脑屏障、大脑局部血流量具有保护作用［12］. 至于黄芪治疗肿瘤的作用一般认为系通过提高机体的免疫功能，增强体内的抗癌能力，调整全身的器官功能而实现的. 单用黄芪S4能促进荷瘤小鼠胸腺细胞增殖，并对S180实体瘤有抑制作用，抑瘤率为35.78%. 研究表明黄芪S4与化疗药合用能改善化疗造成的免疫抑制，且有抑瘤作用［13］. 黄芪是否直接对肿瘤细胞有抑制作用，从目前的文献来看，确少报道. 另一方面，迄今为止，内蒙古黄芪的药理成分的研究结果分析，发现该药主要含皂甙类、多糖类、黄酮类、氨基酸、无机成分、β-谷甾醇、蔗糖、亚油酸、亚麻酸、甜茶碱、和淀粉酶等. 也未发现明显抑癌作用的有效成分，尚有其他未被发现的有抗癌作用的成分也未可知，则是值得进一步研究的问题.
2.2 AMB提取物抑制体外培养的肝癌细胞生长的评价 该作者研究中药黄芪(AMB)提取物对体外培养的人体肝癌细胞的抑癌活性，进行了有益的尝试，若是该研究结果果真能被重复实验和确切证实，也算是有独创性的发现，但从整个研究课题的设计和方法来看，还有不少问题值得商榷.
2.2.1 中药的实验研究有它的特殊性 研究中药的作用既要依据中医的理论要求，又要利用现代科学的实验方法. 一味中药黄芪，就含有很多的药理成分，与西药的单体成分的实验研究方法有所不同，完全照搬西药的研究方法可能得出不同的结果. 该文所用的黄芪水提物，只有一个粗提物，其中含有不少的活性成分，以这样一个实验样品进行体外培养的细胞增殖实验，其结果可能与单一成分有所区别，难免受到水提物本身的PH值、渗透压和其他杂质的影响，而干扰实验结果. 近年来，在中医药理学的研究领域内，不少有识之士就曾提出采用血清药理学的方法，若是运用这一方法可能更有说服力，这确是一个值得探讨的问题. 因此该文采用黄芪水提物加入培养中进行体外实验，则难于排除上述干扰因素的影响. 另一方面，该文的实验设计中，也未设立相应的中药对照组，所以，从中医药理学研究的角度来看，该文所采用的实验方法值得商榷，因而其所得实验结果的说服力也不够.
2.2.2 该文的研究结果与文献上报道的差异 如上所述，一般认为黄芪的水提物或其有效单体成分如黄芪多糖(APS)等对正常机体的细胞代谢，DNA和RNA的合成以及细胞内环核苷酸的含量等有促进作用. 而该文观察到黄芪水提物对肝癌细胞增殖有抑制作用，因此除了对其实验方法的可靠性需要进一步探讨外，其他可能的解释有以下几点：①中药有双向调节作用，例如中药对机体的不同状态，不同组织细胞(一个是正常状态细胞，一个是肝癌细胞)不同剂量和不同剂型等，其实验结果可能不同. ②有可能发现有新的有效成分.
2.2.3 关于该文的实验设计与讨论 该文在实验设计方面存在一些问题值得进一步完善，①MTT显色法和细胞直接计数法是很常规的细胞增殖实验检测技术［14-16］. 应用这二方法时应注意以不同浓度及不同作用时间进行实验，并分析其结果. 本文基本上正确地应用了这些方法，也进行了初步的分析，但是，对于描述细胞生长曲线时没有进行“对数生长期”，“细胞倍增时间”，“最大细胞增殖数”等关键指标进行计算与分析，而这些检测措施应是检测细胞增殖与生长特性的关键指标［17-21］. ②选择AMB浓度时，为什么只增加至800g/L，而没有继续摸索更高的浓度. 因为从实验结果看800g/L的浓度，对细胞抑制率也不是非常理想 继续往上增加AMB浓度，是否也不能进一步抑制细胞的增殖该文没有进行应有的预实验或阐述清楚. ③该文中只是说“将所得数据进行统计处理” ，但针对每一项实验具体采用什么方法统计，统计结果的t值为多少，P值在什么范围均没有交代，而下结论说差异有显著性意义，这难有说服力. ④当检测时间依赖性时，为什么选择700mg/L的浓度没有说明清楚. ⑤本文所有的实验均未脱离MTT一个方法，比较单一、简单，应结合其他多种实验方法进行互相印证，结果方为可靠、准确. ⑥讨论部分过于简单而且几乎就是将结果重复叙述一遍. 作为讨论应该注意下面几个问题：为什么选用这几项方法进行实验，根据选用的方法和所得的结果，应进行之所以产生这样一些结果的可能机制的分析. 而且同样是黄芪提取物，在这之前他人做过怎样类似的工作他们的结果又是如何本文的结果为什么与他人的不一致，可能机制是什么等等，都应进行必要的阐述与讨论.
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